Biseksualiści definiują płeć jako spektrum zamiast binarnego. Oznacza to, że rozpoznają obecność wielu płci poza mężczyzną i kobietą. Mogą identyfikować się jako mężczyzna, kobieta, nie-binarne, transseksualista, agent, intersex, płyn płciowy, androgynous, lub każda inna etykieta, która pasuje do ich tożsamości osobistej. Biseksualiści kwestionują tradycyjne pojęcia ról płci, stereotypów i oczekiwań. Odrzucają etykiety oparte na ekspresji płci, takie jak „feministyczna" czy „męska", a zamiast tego skupiają się na rezonansie emocjonalnym.
W kulturze biseksualnej rezonans emocjonalny atrakcyjność fizyczna. Osoby biseksualne mogą być przyciągane zarówno do mężczyzn, jak i do kobiet, niezależnie od ich tożsamości płciowej lub percepcji. Nadają priorytet związkom intymnym nad powierzchownymi. Zazwyczaj biseksualiści czują się przyciągani przez ludzi, którzy tradycyjnie wyrażają „przeciwstawne" role płci, takie jak lesbijki, geje, tomboys czy księżniczki. Niektóre mogą być przyciągane do konkretnych cech, takich jak zaufanie, wrażliwość lub ambicja, a nie wygląd.
Role płci są definiowane przez społeczeństwo i wielu biseksualistów decyduje się je ignorować. Nie przestrzegają surowych zasad, jak się ubierać, zachowywać, mówić lub zachowywać. Mogą zaniedbywać normy społeczne, przyjmując elementy różnych płci w wyborze odzieży, style wyglądu, hobby i nawyki.
Niektórzy biseksualiści noszą makijaż i obcasy, podczas gdy inni wolą koszulki i dżinsy. Mogą nawet przyjąć stereotypowe zachowanie mężczyzn lub kobiet, nie będąc wyłącznie samcami lub samicami. Pozwala im to uwolnić się od presji zgodności płci i zbadać nowe perspektywy.
Biseksualiści kwestionują również ideę, że płeć powinna dyktować orientację seksualną. Wielu odrzuca pogląd, że heteroseksualność, homoseksualizm i biseksualizm są odrębnymi kategoriami opartymi na tożsamości płciowej. Zamiast tego, postrzegają seksualność jako płynny kontinuum, w którym wiele atrakcji może współistnieć. Mogą spotykać się z partnerami o tej samej lub przeciwnej tożsamości płciowej, angażować się w trzykrotne lub inne niekonwencjonalne relacje oraz eksperymentować z erotyką poza etykietami. Niektóre biseksualiści identyfikują jako panseksualne lub poliamorowe, obejmujące wszystkie formy intymności bez restrykcyjnych definicji.
Biseksualiści kwestionują myśl, że płeć jest zawsze widoczna lub stała. Wielu czuje się komfortowo prezentując się w sposób, który nie pasuje do ich przypisanego seksu przy urodzeniu. Mogą przejść lub wyrazić się, jak chcą, niezależnie od oczekiwań zewnętrznych. Robiąc to, na nowo definiują co to znaczy być mężczyzną, kobietą, transseksualistą, interseksualistą itp., i odrzucają społeczne założenia co do tego, jak te tożsamości powinny wyglądać lub działać. Nadają priorytet rezonansowi emocjonalnemu nad normami społecznymi, szukając sensownych powiązań, a nie powierzchownych.
W jaki sposób ludzie biseksualni na nowo definiują płeć jako dziedzinę rezonansu emocjonalnego, a nie kategorię organizacyjną?
Wielu biseksualistów uważa, że płeć nie jest koncepcją stałą lub statyczną, ale czymś, co może być płynne i stale się zmienia. Mogą czuć się przyciągani zarówno do mężczyzn, jak i do kobiet w różnych punktach życia, lub mogą czuć się przyciągani do męskich cech w jednej osobie i kobiecych cech w innej. Dla niektórych biseksualistów, tożsamość płci jest bardziej o tym, jak wyrażają siebie, a nie zestaw sztywnych oczekiwań opartych na orientacji seksualnej.